细菌16S

系列课程:

菌群多样性、代谢组、宏基因组、全基因组

检测内容:

16SrDNA是细菌的系统分类研究中最有用的和最常用的分子钟,其进化具有良好的时钟性质,在结构与功能上具有高度的保守性,素有“细菌化石”之称。

16S rRNA基因测序: 16S rRNA基因为编码原核生物核糖体小亚基rRNA的DNA序列,主要进行细菌或古菌的多样性分析。

实验对象,16S,高变区域

16S与原核微生物分析 —16S序列分析

实验方法:

检测平台:二代高通量平台:Illumina平台;

目前的三大数据库:Silva(v119)、RDP、GreenGene。

常用的是Silva数据库,包含原核、真核、古菌的信息,是目前最全面的数据库,库中共53万多个参考序列。(目前最新的Silva v123中有59万条参考序列,较silva v119增加了6万多参考序列)

单V区 V1 V2 V3 V4 V5
序列数 98004 357683 359488 397491 325460

实验和数据分析流程

实验流程,多元分析,流程,结果


结果展示:

客户只有一种分组:

结果图1

客户有多种比较:

结果图2

多元分析组图:

结果图5.1
结果图5.4
结果图5.2
结果图5.5
结果图5.3

送样要求:

送样时请尽量使用冰盒(泡沫盒+干冰+冰袋),以保证运输过程中的低温条件(干冰的挥发消耗量约为3公斤/天)。在打包时先放入足量的干冰,之后用冰袋填充泡沫盒中间的空隙,为了保持冰盒中的低温环境,建议采用厚一点的泡沫盒。

若无法实现低温保存,可以采用格微生物科技(上海)有限公司研发的微生物DNA常温保存液,可以实现微生物样本的常温保存和运输。

取样建议:

类型 样本 重量或体积
人体 粪便 1g
动物 粪便 1g,最少0.1g
环境 土壤 1g,最少0.1g

保存条件(二选一)

1、-80冰箱冻存;

2、采购上海格微生物 采集保存套装,可常温保存15天

生物学重复:

人体粪便样本,每组不低于30例为宜


文献参考:

文献图1
文献图2

需要注意的是,相同引物对微生物类型存在不同偏好,在实验前需要确定是不是有特别关注的物种,通用引物对也是具有一定局限性的